Reação em Cadeia da Polimerase em tempo real (qPCR)

A Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) é um método cada vez mais utilizado para detecção de microrganismos e marcadores genéticos gerando cópias da sequência de DNA. Possui diversas aplicações como o diagnóstico de doenças infecciosas, alguns tipos de câncer e até anormalidades genéticas. Existe também a variação da PCR chamada de qPCR, ou PCR em tempo real, ainda mais específica e sensível que a primeira. Clique aqui e entenda qual a diferença entre PCR e qPCR?

Durante a metodologia de qPCR as amostras e reagentes são submetidos a mudanças rápidas de temperaturas que chegam a até 95°C, através dessas etapas e alterações é que ocorre a amplificação da sequência, visualizada em tempo real por meio de corantes fluorescentes.

A elevada sensibilidade dessa técnica possibilita excelentes resultados, porém também está sujeita a presença de inibidores e contaminação que podem afetar a sua eficiência. Os plásticos para qPCR tem um grande impacto sobre os ensaios em tempo real e precisam receber um tratamento especial para não interferir na reação, ocasionando um resultado errado, baixa concentração ou mesmo inviabilizando o processo.

Geralmente os consumíveis (placas, tubos, tampas e filmes seladores) não ganham importância, porém a qualidade dos plásticos pode influenciar diretamente na sensibilidade e reprodutibilidade dos testes. Dessa forma, para garantir a confiabilidade dos resultados é necessário usar consumíveis de boa qualidade, assegurando assim o alto desempenho.

Saiba quais são as características essenciais dos consumíveis que vão garantir a sensibilidade analítica e a confiabilidade da PCR em tempo real.

Qualidade dos consumíveis para a técnica de qPCR

Especificação da matéria-prima 

• Estéreis e livres de DNase, RNase, DNA, RNA, pirogênios e metais, garantindo que contaminantes não sejam liberados na reação;
• Fabricação em polipropileno que proporciona baixíssima interação com DNA, RNA e proteínas, aumentando a condutividade térmica e maximizando a funcionalidade da reação;
• Baixa atração a materiais biológicos e íons;
• Propriedades de baixa evaporação possibilitando a reação mesmo com volumes mínimos, reduzindo também os custos com reagentes.

Microtubos para qPCR em tiras Kasvi

Uniformidade dos plásticos para qPCR

• Paredes extremamente uniformes para proporcionar o aquecimento homogêneo da amostra;
• Resistência, flexibilidade e uniformidade para suportar maior pressão mecânica, evitando possíveis fissuras microscópicas invisíveis a olho nu;
• Paredes finas na parte inferior permitem a máxima transferência de calor e paredes mais espessas na parte superior minimizam a perda por evaporação;

Microtubos para qPCR Kasvi

Evaporação e vedação dos tubos e poços

• A forma como a tampa é fechada influencia a evaporação, como os volumes são pequenos é muito importante  ter uma selagem eficiente e ficar atento a este aspecto.
• Sistema de vedação eficiente das tampas para possibilitar reações livres de vazamento, reduzindo a evaporação;
• Design  adequado para evitar deformações causadas pela variação de temperatura e pressão;
• Tampas que evitam o acúmulo de resíduos: o líquido desliza automaticamente para o fundo, possibilitando maior recuperação de volume;
• Área óptica recuada da tampa para prevenir o contato manual durante a manipulação.

Sistema de vedação dos Microtubos Kasvi

Coloração dos materiais para qPCR

• Materiais com coloração levemente fosca, fosca e branca proporcionam um aumento do sinal da reação;
• Comparado aos plásticos transparentes convencionais, o material fosco reduz a interferência de sinal em até 40%. Já os produtos brancos aumentam a leitura do sinal em até 90%.

	Microplaca para qPCR
	Microplaca branca para qPCR