A eletroforese é um método habitualmente usado para separar e também purificar macromoléculas, principalmente ácidos nucleicos e proteínas. Essas macromoléculas são submetidas a um campo elétrico, na qual migram para um polo positivo ou negativo de acordo com a sua carga. No caso de uma carga positiva, seguirá para o polo negativo e se for negativa, irá na direção do polo positivo.

O fluxo migratório é determinado pelo peso molecular, na qual moléculas de menor peso migram mais rápido que as de maior peso, formando as bandas características que serão visualizadas posteriormente.

Migração dos fragmentos conforme peso molecular e formação das bandas

Visualização das bandas

Eletroforese e suas Aplicações

A eletroforese é utilizada em inúmeros processos de biologia molecular, entre eles:

• Ciência forense– para comparar o DNA encontrado no local do crime com o de possíveis suspeitos.
• Genética– teste de paternidade, diferenciação de espécies ou linhagens e engenharia genética.
• Microbiologia– detecção de diferentes patógenos como vírus, bactérias e fungos.
• Bioquímica– detecção da expressão de proteínas.

Passo a passo da Eletroforese em Gel

A eletroforese ocorre dentro de uma matriz ou gel que possibilita a corrida da amostra. O gel é introduzido dentro de uma solução tampão específica para eletroforese que fornece as condições ideais para a passagem da corrente e a manutenção do valor do pH.

Em seguida, as amostras são pipetadas em pequenos poços feitos com um pente no gel. Para ocorrer a migração, a cuba e fonte de eletroforese exercem uma voltagem, corrente e potência constantes, esses fatores irão determinar o sucesso da técnica.

E por fim, as bandas são visualizadas sob luz ultravioleta ou LED, através do equipamento chamado de transiluminador.

Confira o vídeo com o passo a passo da eletroforese em gel:

Eletroforese em cuba horizontal

Eletroforese em cuba vertical

Equipamentos e materiais utilizados na eletroforese em gel:

	Agarose: extraída a partir de algas marinhas é extremamente fácil de preparar, basta misturar o pó de agarose com solução tampão e derreter por aquecimento, ao resfriar transforma-se no gel de agarose.
	Tampão de eletroforese: geralmente Tris-acetato-EDTA (TAE) ou Tris-borato-EDTA (TBE).
	Marcador de peso molecular: estabelece o padrão de peso molecular que serve como ponto de referencia e monitoramento para a eletroforese.
	Corante: para visualizar o resultado da corrida sob a luz ultravioleta, utilizava-se o brometo de etídeo no gel, porém esta é uma substância cancerígena e pode interferir no padrão de migração. A melhor opção em sua substituição é o corante safer, pois além de mais sensível não é mutagênico.
	Cuba de eletroforese e fonte de eletroforese: possibilita o preparo do gel e fornece a corrente necessária para uma corrida uniforme.
	Transiluminador: fonte de luz UV ou LED usada para visualizar o resultado da corrida de eletroforese.