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Agar Mueller Hinton – Você conhece seu uso e aplicação?
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Agar Mueller Hinton – Você conhece seu uso e aplicação?

5 min de leitura

O Agar Mueller Hinton (MH) é um meio de cultura utilizado para realizar Testes de Sensibilidade aos Antimicrobianos (TSA). Esse teste também é conhecido como Antibiograma, difusão em disco ou ainda teste de suscetibilidade Kirby-Bauer. A finalidade do método consiste em testar se a bactéria em análise é sensível a determinados antibióticos.

O teste de difusão em disco foi descrito em 1966 por Kirby e Bauer, por isso o nome da metodologia, sendo uma das mais simples e confiável utilizada pelos laboratórios de microbiologia para a determinação da sensibilidade a antibacterianos. O Agar Mueller Hinton é o meio padrão recomendado pela OMS para essa finalidade, sendo seu princípio básico a propagação do antimicrobiano na superfície do agar, a partir de um disco de papel.

Nos últimos tempos a utilização indiscriminada de antibióticos tem provocado a resistência bacteriana aos medicamentos. Essa resistência se expande com muito mais agilidade que o desenvolvimento de novos antibióticos. Com o resultado do teste de sensibilidade o médico saberá se a bactéria testada é sensível ou resistente ao medicamento, ajudando-o na escolha correta da droga e na dosagem ideal, determinando quais são mais eficientes no tratamento do paciente. Esse processo direcionado também ajuda a diminuir a frequência de bactérias resistentes aos medicamentos.

Meios de cultura na identificação de microrganismos patogênicos

 

Método do Antibiograma por difusão

O primeiro passo é isolar a bactéria a partir da amostra do paciente. É preparado o meio Mueller Hinton que fornece as condições necessárias para o crescimento do microrganismo. A bactéria deve ser uniformemente espalhada pela placa de Petri que contém o meio de cultura.

Discos de papel são preparados e impregnados com uma concentração padrão de um determinado antibiótico, para verificar a resistência em relação a cada um deles, então são uniformemente distribuídos e levemente pressionados sobre a superfície do agar.

O antibiótico teste começa a difundir para fora a partir dos pequenos discos, criando um gradiente de concentração do antibiótico no agar.

Após uma incubação de um dia para o outro, o crescimento bacteriano em volta de cada disco é observado. A área clara que rodeia o disco (halo) revela o local na qual as bactérias não conseguem se desenvolver. Quanto maior o halo, maior a sensibilidade da bactéria ao antibiótico.

 

Como os microrganismos se desenvolvem em um Meio de Cultura?

 

A área em volta de um disco antibiótico que não tem crescimento é chamada de zona de inibição. Esta zona é medida em milímetros (mm) e comparada a um gráfico de interpretação padrão usado para categorizar a amostra como sensível, intermediária ou resistente. Se a zona de inibição observada é maior ou igual ao tamanho da zona padrão, o microrganismo é considerado sensível ao antibiótico. Por outro lado, se a zona de inibição observada é menor, o microrganismo é considerado resistente.

antibiograma

Difusão de disco em Agar Mueller Hinton

A concentração inibitória mínima (CIM) é a concentração mais baixa de fármaco que inibe o crescimento da bactéria. Assim, existe uma relação entre a zona de inibição e a CIM, sendo as medidas inversamente proporcionais, ou seja, quanto maior a área e menor a CIM, melhor é a potencialização do antibiótico.

 

 

Qual a diferença entre Agar Mueller Hinton I e Agar Mueller Hinton II?

Não existe diferença entre os testes de suscetibilidade Kirby-Bauer realizados com o Agar Mueller Hinton I (MH-I) e Agar Mueller Hinton II (MH-2), são meios recomendados pela Clinical and Laboratory Standard Institute (CLSI) para a metodologia. Ambos têm os mesmos componentes, porém a padronização entre eles é que muda.

No caso do MH-I devido à metodologia de produção, os componentes não são padronizados e os teores de timidina/timina e Cálcio/Magnésio podem variar. Assim é preciso realizar um controle de qualidade mais rigoroso para cada lote antes do uso para teste de antibiograma, por isso seu custo é inferior.

Já para o MH-II os constituintes são padronizados, sendo fabricados para conter baixos níveis de timina e timidina, com níveis controlados de íons de cálcio e magnésio, as concentrações são mais adequadas e conhecidas entre os diferentes lotes. Dessa forma a técnica fica menos suscetível a influência destes agentes, conferindo uma qualidade maior ao teste.

 Agar Mueller Hinton. Frasco 500g

Agar Mueller Hinton

Agar Mueller Hinton II. Frasco 500g

Agar Mueller Hinton II

Composição do Agar Mueller Hinton

O ácido hidrolisado de caseína e extrato de carne fornecem aminoácidos, nitrogênio, minerais, vitaminas, carbono e outros nutrientes que suportam o crescimento de microrganismos. O amido atua como substância protetora contra moléculas tóxicas que podem estar presentes no meio. A hidrólise do amido durante a autoclavagem fornece uma pequena quantidade de glicose, a qual é uma fonte de energia. E o agar é o agente de solidificação.

>> Leia também: Meios de Cultura – Como diferenciar meio enriquecido, seletivo e diferencial


Referência: ANVISA

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