O microscópio é o instrumento mais importante para a identificação e compreensão de princípios gerais e características especiais em relação à estrutura das células, tecidos e microrganismos. Assim, os microscópios abrem fronteiras que não podem ser observadas a olho nu. É por esta razão que desempenha um importante papel na ciência, biologia e medicina, fazendo-nos conhecer um mundo que consideramos microscópico.

A microscopia como a conhecemos teve início com Anton van Leeuwenhoek, considerado o “pai da microbiologia”, no século XVII. Suas lentes melhoradas no microscópio simples permitiram visualizar protozoários e bactérias. Algum tempo mais tarde Robert Hooke observou as primeiras células, através da invenção do primeiro microscópio composto, usando dois conjuntos de lentes para obter o aumento na ampliação. Desde então o microscópio vem sendo aperfeiçoado incessantemente.

Manipulação do microscópio óptico

Existem muitos tipos de microscópios, permitindo diferentes níveis de ampliação e produzindo diferentes tipos de imagens. Além disso, variam desde um design básico até os de alta complexidade, que oferecem maior resolução e contraste.

O microscópio óptico é, sem dúvida, o mais utilizado. Todos consistem fundamentalmente em um sistema de duas lentes, uma fonte de luz e partes mecânicas ajustáveis para determinar a distância focal entre as lentes e a amostra.

A maioria dos microscópios ópticos permite uma ampliação de 40x até 1000x. Ele é considerado composto, pois apresenta dois sistemas de lentes: ocular, que fica próximo ao olho do observador e objetiva, próxima à preparação a ser observada. A lente ocular geralmente amplia 10x e uma lente objetiva amplia 40x.  A maioria das vezes o microscópio vem com um conjunto de lentes objetivas que podem ser trocadas, variando assim a ampliação.

Você sabe manusear um microscópio corretamente?

Para observar a amostra, primeiro você precisa baixar a platina completamente e inserir a lâmina com a lamínula, fixando o objeto com a pinça. Além disso, é preciso se certificar de que o diafragma regule corretamente a quantidade de luz que atinge o campo de visão do microscópio. Na sequência,  é preciso selecionar a objetiva de menor aumento e fazer o ajuste macro e micrométrico, olhando através das lentes oculares. Você também pode usar o revólver para mudar para a objetiva seguinte.

Ainda não conseguiu entender como é realizada a observação no microscópio?

Deve ser pelo fato de que a microscopia tem uma terminologia muito específica. Você precisa estar familiarizado com os termos para garantir uma correta manipulação e configuração do equipamento, produzindo assim imagens nítidas.

No nosso post “Microscópio Óptico: Você conhece a sua estrutura e aplicações?” você confere todos os componentes que formam um microscópio. E logo a abaixo, descubra as terminologias mais utilizadas em microscopia.

Terminologias utilizadas na microscopia

Abertura Numérica (N.A.)

A abertura numérica é um fator importante que determina a eficiência do condensador e da objetiva. É representada pela fórmula: (NA = ηsinα), onde η é o índice de refração de um meio (ar, água, óleo de imersão, etc.) entre a objetiva e o espécime ou condensador, e α é metade do ângulo máximo em que a luz entra ou sai da lente de ou para um ponto do objeto focado no eixo óptico.

Ajuste de dioptria

O ajuste da ocular de um instrumento para proporcionar acomodação para as diferenças de visão do observador.

Ampliação

O número de vezes que o tamanho da imagem excede o objeto original. Assim, é a razão entre a distância entre dois pontos na imagem e a distância entre os dois pontos correspondentes no objeto.

Ampliação total

A ampliação total de um microscópio é o poder de ampliação individual da objetiva multiplicado pelo da ocular.

Campo de visão (F.O.V.)

A parte do campo da imagem, que é visualizada na retina do observador, e, portanto, pode ser vista em qualquer momento. O campo de número de exibição é agora uma das marcas padrão da ocular.

Campo de visão real (Real Viewfield)

O diâmetro em milímetros do campo do objeto.
Real Viewfield = Campo de visão da ocular / ampliação da objetiva

Exemplo:
Campo de visão da ocular = 20 mm
Magnificação da objetiva = 10X
Diâmetro do campo do objeto = 20/10 = 2,0mm

Condensador Abbe

Um condensador com duas lentes, localizado abaixo da platina do microscópio, com a função de coletar luz e direcioná-la para o objeto a ser examinado. Sua alta abertura numérica torna-o particularmente adequado para uso com a maioria das objetivas de ampliação média e alta.

Contraste de fase

Uma forma de microscopia que converte diferenças na espessura do objeto e no índice de refração em diferenças na amplitude e intensidade da imagem.

Diafragma

Controla o tamanho efetivo da abertura do condensador, regulando dessa forma a quantidade de luz que entra.

Distância de trabalho

Esta é a distância entre a lente frontal objetiva e a parte superior da lamínula quando o espécime está em foco. Na maioria dos casos, a distância de trabalho de uma objetiva diminui à medida que a ampliação aumenta.

Eixo X

O eixo que geralmente é horizontal em um sistema de coordenadas bidimensional. No microscópio, o eixo X dos estágios da amostra é considerado o que corre da esquerda para a direita.

Eixo Y

O eixo que geralmente é vertical em um sistema de coordenadas bidimensional. No microscópio, o eixo Y dos estágios da amostra é considerado o que corre de frente para trás.

Espessura da lamínula

As objetivas de luz transmitida são projetadas para reproduzir imagens de espécimes cobertos por uma lamínula fina. A espessura desta pequena peça de vidro é agora padronizada em 0,17 mm para a maioria das aplicações.

Filtro

Os filtros são elementos ópticos que transmitem luz seletivamente. Assim, pode absorver parte do espectro, reduzir a intensidade ou transmitir apenas comprimentos de onda específicos.

Micrômetro (μm)

Uma unidade métrica de medida de comprimento.
μm = 1×10-6 metros ou 0.000001 metros

Nanômetro (nm)

Uma unidade de comprimento no sistema métrico.
Nm= 1×10−9 metro ou 0.000000001 metro

Óleo de imersão

Qualquer líquido que ocupe o espaço entre o objeto e a objetiva do microscópio. Esse líquido geralmente é necessário para objetivas de distância focal de 3 mm ou menos.

Poder de resolução

Uma medida da capacidade do sistema óptico de produzir uma imagem que separe dois pontos ou linhas paralelas no objeto.

Profundidade de foco

A profundidade axial do espaço em ambos os lados do plano da imagem dentro da qual a imagem é focada. Portanto, quanto maior a N.A. da objetiva, menor a profundidade de foco.

Resolução

O resultado da exibição de detalhes finos em uma imagem.

Microscópio Kasvi

Microscópio Biológico Binocular Série Eco	Microscópio Biológico Binocular Série RED Bateria	Microscópio Biológico Binocular série RED	Microscópio Biológico  Trinocular Série RED
Câmeras para Microscopia	Lâminas para Microscopia	Lamínulas para Microscopia

Referências 

• Instructions Manual – Motic
• www.if.ufrj.br
• Walter Mannheimer.  Microscopia dos Materiais: Uma Introdução. Sociedade Brasileira de Microscopia e Microanálise. 2002